抗體結(jié)構(gòu)與類別

1. 抗體結(jié)構(gòu)

抗體以一個或多個近似“Y”字形單體存在，每個Y字形由4條多肽鏈組成，包含兩條分子量較大的重鏈和兩條分子量較小的輕鏈。輕鏈和重鏈通過二硫鍵連接形成。每條重鏈包含3-4個恒定區(qū)（CH）和一個可變區(qū)（VH），輕鏈包含一個恒定區(qū)（CL）和一個可變區(qū)（VL）?？贵w的Y形臂區(qū)被稱為抗原結(jié)合區(qū)（Fab區(qū)）。Y形結(jié)構(gòu)基座的作用是調(diào)節(jié)免疫活動，該區(qū)域被稱為可結(jié)晶區(qū)（Fc區(qū)）。

2. 抗體類別

在大多數(shù)哺乳動物，抗體根據(jù)重鏈的不同，一共分為五種,分別用希臘字母α、δ、ε、γ和 μ 來命名,相對應(yīng)組成的抗體就稱為 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM 五種抗體。

什么是多克隆抗體？

多克隆抗體（Polyclonal Antibody, pAb）是由多個B細(xì)胞克隆分泌的一組抗體混合物，能夠識別并結(jié)合同一抗原上的不同表位。相比于僅針對單一表位的單克隆抗體 (mAb)，多克隆抗體的優(yōu)勢在于：

1. 廣譜識別：即使目標(biāo)蛋白發(fā)生輕微突變或結(jié)構(gòu)改變，多克隆抗體仍可與其結(jié)合，保證檢測的靈敏度和穩(wěn)定性。

2. 高靈敏度：由于同時識別多個表位，多克隆抗體在免疫檢測中信號更強(qiáng)。

3. 快速制備：生產(chǎn)周期短，相比單克隆抗體更容易獲得。

4. 適應(yīng)性強(qiáng)：適用于高異質(zhì)性抗原，特別是在抗體檢測、免疫檢測及質(zhì)量控制領(lǐng)域。

多克隆抗體的制備流程

多克隆抗體的制備流程通常包括以下幾個步驟：

1. 抗原制備：選擇合適的抗原（純化蛋白、多肽等），并進(jìn)行質(zhì)量優(yōu)化。

2. 免疫動物：將抗原與佐劑（如弗氏佐劑）混合后注射到實(shí)驗(yàn)動物（如兔子、小鼠、山羊等）體內(nèi)。

3. 血清采集：經(jīng)過多輪免疫后，檢測抗體效價，當(dāng)?shù)味冗_(dá)到峰值時采集血液樣本并分離血清。

4. 抗體純化：采用蛋白A/G親和層析、硫酸銨沉淀等方法去除非特異性蛋白，提高抗體純度。

5. 質(zhì)量檢測：通過ELISA、Western Blot等方法驗(yàn)證抗體效價和特異性，確保其適用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)或生產(chǎn)。

HCP多抗：生物制藥質(zhì)量控制的關(guān)鍵工具

1. 什么是HCP多抗

在生物藥物生產(chǎn)過程中，宿主細(xì)胞（如CHO細(xì)胞、大腸桿菌、Sf9細(xì)胞等）用于表達(dá)重組蛋白，但在純化過程中，宿主細(xì)胞蛋白（Host Cell Proteins, HCPs）可能以雜質(zhì)的形式殘留在最終產(chǎn)品中。這些殘留HCP可能影響藥物的安全性、免疫原性和穩(wěn)定性，因此需要嚴(yán)格控制。HCP檢測是生物制藥質(zhì)量控制中的核心環(huán)節(jié)，而HCP多克隆抗體在這一過程中發(fā)揮了重要作用。

2. HCP多抗的作用

HCP多抗的主要目標(biāo)是最大程度覆蓋并檢測生物藥生產(chǎn)過程中及最終產(chǎn)品中的宿主細(xì)胞殘留蛋白，為生物藥質(zhì)量控制和法規(guī)合規(guī)提供關(guān)鍵支持。HCP多抗的主要作用包括以下幾點(diǎn)：

2.1 高覆蓋率識別宿主細(xì)胞蛋白：HCP多抗可以識別HCP的多個不同表位，從而實(shí)現(xiàn)更全面的HCP檢測，避免因單個抗原表位丟失導(dǎo)致的漏檢問題；針對不同宿主細(xì)胞（如CHO、大腸桿菌、Sf9細(xì)胞等），可通過優(yōu)化免疫策略，提高對特定宿主HCP的識別覆蓋率，使檢測更可靠。HCP組成可能隨細(xì)胞培養(yǎng)條件、表達(dá)系統(tǒng)的變化而發(fā)生差異，多抗能夠容忍一定程度的蛋白變化，提高檢測穩(wěn)定性。

2.2 關(guān)鍵質(zhì)量控制工具，支持生物制品申報：全球主要藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)（如FDA、EMA、NMPA）均要求對HCP進(jìn)行嚴(yán)格檢測，確保其殘留量符合安全標(biāo)準(zhǔn)；HCP多抗的應(yīng)用可以幫助藥企在藥物開發(fā)、臨床試驗(yàn)和上市申報階段滿足監(jiān)管要求。HCP多抗可用于不同生產(chǎn)階段（細(xì)胞培養(yǎng)液、純化中間體、最終產(chǎn)品）的檢測，幫助優(yōu)化純化工藝，提高產(chǎn)品質(zhì)量；在生物藥大規(guī)模生產(chǎn)過程中，HCP多抗可用于監(jiān)測不同生產(chǎn)批次間的HCP水平，確保生產(chǎn)一致性，降低質(zhì)量風(fēng)險。

2.3 促進(jìn)工藝優(yōu)化，提高藥物安全性：HCP多抗可用于篩選和優(yōu)化純化工藝，提高宿主蛋白的去除效率，確保最終產(chǎn)品符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；通過長期監(jiān)測HCP水平，評估HCP可能帶來的蛋白降解或免疫原性風(fēng)險，提升藥物長期穩(wěn)定性；某些HCP可能會誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，影響藥物療效。HCP多抗可以輔助分析高風(fēng)險HCP，提高產(chǎn)品安全性。

3. HCP多抗的研發(fā)與制備

3.1 HCP抗原制備：從目標(biāo)宿主細(xì)胞（CHO、大腸桿菌、Sf9等）中提取全蛋白，作為免疫抗原，通過超速離心、層析分離等方法分離不同蛋白，保留更多HCP成分，確保多抗能覆蓋盡可能多的宿主蛋白。

3.2 動物免疫：選擇兔、羊等實(shí)驗(yàn)動物，通過多次免疫，使動物體內(nèi)產(chǎn)生針對HCP的廣譜多克隆抗體。

3.3 血清采集與抗體純化：使用親和層析（如蛋白A/G）或免疫親和層析純化對多抗血清進(jìn)行純化，獲取HCP多抗。

3.4 抗體檢測：通過ELISA、Western Blot等方法評估抗體親和力，并通過2D-DIGE或質(zhì)譜分析等方法對抗體覆蓋率進(jìn)行檢測。