精準(zhǔn)檢測(cè)，助力mRNA產(chǎn)業(yè)新突破！

2024-12-11 06:00:31

次

近年來(lái)mRNA疫苗技術(shù)進(jìn)入了迅速發(fā)展的時(shí)代，T7 RNA Polymerase作為催化酶被用于mRNA疫苗的生產(chǎn)過(guò)程。然而該添加物的微量殘留會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量，影響其后續(xù)使用效果。產(chǎn)品市售前需對(duì)其工藝中的添加物進(jìn)行殘留檢測(cè)，以保證產(chǎn)品的質(zhì)量。因此，在整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程中，質(zhì)量控制至關(guān)重要。

然而，T7 RNA Polymerase殘留活性檢測(cè)的方法較少，主要包括放射性同位素法、分光光度法、熒光淬滅方法等等，然而上述方法難以實(shí)現(xiàn)高通量，同時(shí)需合成特定的寡聚核糖核酸分子作為作用底物，而且還需要設(shè)計(jì)合成特定帶修飾的RNA探針，成本較高；或是易產(chǎn)生放射性污染，或是步驟多、周期長(zhǎng)。

關(guān)于T7 RNA Polymerase的殘留檢測(cè)新方法中，中國(guó)發(fā)明專利CN202110755117 .0公開了一種具有信號(hào)放大效應(yīng)的可視化檢測(cè)爆炸物分子的生物傳感器及其制備方法和應(yīng)用，通過(guò)將T7 RNA Polymerase與生物傳感器結(jié)合，通過(guò) T7 RNA Polymerase與受體的結(jié)合將化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)檢測(cè)T7 RNA Polymerase的含量，檢測(cè)操作簡(jiǎn)單，方便，但是生物傳感器的信號(hào)不穩(wěn)定，各個(gè)樣本之間的差異性較高。專利US5827661A公開了一種新穎的檢測(cè)方法，通過(guò)采用RNA聚合酶發(fā)生鏈?zhǔn)綌U(kuò)增，從而可以放大檢測(cè)時(shí)的信噪比，使檢測(cè)具有更低的檢出限，但其檢測(cè)時(shí)間周期長(zhǎng)，準(zhǔn)備工作復(fù)雜，受檢測(cè)環(huán)境、人員操作影響較大，整個(gè)物料準(zhǔn)備、檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜，且出錯(cuò)率高。而酶聯(lián)免疫法檢測(cè)，其操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間短，可以短時(shí)間檢測(cè)多個(gè)樣品，且準(zhǔn)確率相對(duì)較高，極大地便利了mRNA疫苗相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)檢工作[1]。

目前寶銳生物自研出抗T7 RNA Polymerase 的高靈敏度的單克隆抗體（鼠源），可通過(guò)ELISA快速檢測(cè)出殘留量，且準(zhǔn)確率高，極大地便利了mRNA疫苗相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)檢工作。以自研抗體為原料的試劑盒已上市。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

1. 單克隆抗體簡(jiǎn)介

單克隆抗體 (monoclonal antibody)應(yīng)用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)將免疫動(dòng)物的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，通過(guò)HAT、HT篩選，ELISA檢測(cè)，有限稀釋法亞克隆，篩選出具有分泌抗體功能又能無(wú)限繁殖的來(lái)源于單一B細(xì)胞的雜交瘤細(xì)胞，該雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體，就是單克隆抗體 [2]。單抗具有高特異性、高均一性、高效性和無(wú)限供應(yīng)性，被廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域，包括對(duì)疾病(包括癌癥)的診斷、預(yù)防和治療等方面。

2. 單克隆抗體技術(shù)發(fā)展歷程

在20世紀(jì)70年代，B細(xì)胞癌多發(fā)性骨髓瘤被發(fā)現(xiàn)。據(jù)了解，這些癌性B細(xì)胞都產(chǎn)生單一類型的抗體(一種病變蛋白)，這被用來(lái)研究抗體的結(jié)構(gòu)，但還不可能產(chǎn)生對(duì)特定抗原有特異性的均一抗體 [3]。

1975年英國(guó)科學(xué)家Milstein和Kohler發(fā)明了單克隆抗體技術(shù)，他們成功將骨髓瘤細(xì)胞系與B細(xì)胞融合，創(chuàng)造出能產(chǎn)生抗體的雜交瘤，并因此獲得1984年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)[4]。

1986年，英國(guó)生物化學(xué)家格雷格·溫特（Gregory P. Winter）和他的團(tuán)隊(duì)開創(chuàng)了人源化單克隆抗體的技術(shù) [5]，消除了許多單克隆抗體在一些病人身上引起的反應(yīng)。因此獲得2018年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。

2018年，美國(guó)免疫學(xué)家詹姆斯·艾利森（James P. Allison）和日本免疫學(xué)家本庶佑（Tasuku Honjo）發(fā)現(xiàn)了通過(guò)使用抑制性連接的單克隆抗體可抑制負(fù)面免疫調(diào)節(jié)，從而進(jìn)行癌癥治療。因此獲得諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。[6]

單克隆抗體技術(shù)從根本上解決了在抗體制備中長(zhǎng)期存在的特異性和可重復(fù)性問(wèn)題，可用于探討：

①蛋白質(zhì)的精細(xì)結(jié)構(gòu)；

②淋巴細(xì)胞亞群的表面新抗原；

③組織相容性抗原；

④激素和藥物的放射免疫（或酶免疫）分析；

⑤腫瘤的定位和分類；

⑥純化微生物和寄生蟲抗原；

⑦免疫治療和與藥物結(jié)合的免疫-化學(xué)療法 ( “導(dǎo)彈”療法，利用單克隆抗體與靶細(xì)胞特異性結(jié)合，將藥物帶至病灶部位?？芍苯佑糜谌祟惣膊〉脑\斷、預(yù)防、治療以及免疫機(jī)制的研究。）

幾十年來(lái)，雜交瘤技術(shù)作為常規(guī)的單克隆抗體制備技術(shù)發(fā)展成熟，應(yīng)用時(shí)間長(zhǎng)，目前批準(zhǔn)用于治療用途的抗體中有 90% 以上是由該技術(shù)產(chǎn)生的。

3. 單克隆抗體制備(雜交瘤技術(shù))過(guò)程

參考文獻(xiàn)：

[1] mRNA疫苗質(zhì)量分析程序——指南草案. 美國(guó)藥典（USP）第二版. 2023.04.

[2] 單克隆抗體的制備過(guò)程．生物幫資訊．2012-05-22.

[3] 單克隆抗體技術(shù)的研究進(jìn)展[J]，吉林工商學(xué)院學(xué)報(bào)，潘艷，2014，（5）.

[4] Tansey EM, Catterall PP (Jul 1994). "Monoclonal antibodies: a witness seminar in contemporary medical history". Med. Hist. 38 (3): 322–7. doi:10.1017/s0025727300036632. PMC 1036884. PMID 7934322.

[5] Marks LV, A Healthcare Revolution in the Making: The Story of César Milstein and Monoclonal Antibodies: Making monoclonal antibodies.

[6] Riechmann L, Clark M, Waldmann H, Winter G (1988). "Reshaping human antibodies for therapy". Nature. 332 (6162): 323–7. Bibcode:1988Natur.332..323R. doi:10.1038/332323a0. PMID 3127726.