在生物制藥領(lǐng)域,利用培養(yǎng)的宿主細(xì)胞(如細(xì)菌、酵母、哺乳動物、昆蟲或植物細(xì)胞)生產(chǎn)重組蛋白、抗體、疫苗等生物藥物的過程中,由于細(xì)胞分泌、應(yīng)激、裂解及純化工藝而產(chǎn)生的雜質(zhì)蛋白被稱為宿主蛋白。藥物中殘留的宿主蛋白可能具有免疫原性、影響藥物質(zhì)量、安全性和有效性,因此在研發(fā)下游純化的工藝時,必須具有一種科學(xué)合理的測定成品或者半成品中宿主蛋白濃度的方法。
酶聯(lián)免疫法(ELISA)作為一種靈敏度高、操作簡便的技術(shù)手段,已被廣泛應(yīng)用于E.coli宿主細(xì)胞蛋白殘留的檢測。
酶聯(lián)免疫法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,簡稱ELISA) 是一種基于抗原-抗體特異性反應(yīng)的免疫學(xué)檢測技術(shù),包含雙抗體夾心法、間接法、競爭法等。該方法通過將酶與特異性抗體或抗原相結(jié)合,實現(xiàn)對目標(biāo)分子的高靈敏度檢測。
在生物制藥領(lǐng)域,ELISA常用于檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液、發(fā)酵液或純化樣品中的宿主細(xì)胞蛋白,以確保藥物產(chǎn)品的安全性和純度。
酶聯(lián)免疫檢測原理
01
免疫原性
宿主細(xì)胞蛋白具有多種生理化學(xué)和免疫學(xué)特性的復(fù)雜混合物,可能會觸發(fā)Toll-Like受體介導(dǎo)的先天免疫反應(yīng),或者直接由宿主細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子刺激機(jī)體,產(chǎn)生組胺,發(fā)生炎癥反應(yīng)。因此幾乎所有HCP都有作為外來蛋白藥物的臨床安全風(fēng)險。
02
類免疫佐劑作用
可以作為佐劑增加機(jī)體對治療蛋白的免疫反應(yīng),及產(chǎn)生抗體“ADA”,從而直接影響藥物在生物分布,藥代動力學(xué)和生物活性。
03
影響產(chǎn)品穩(wěn)定性
宿主細(xì)胞蛋白潛在的蛋白酶或“輔料酶”活性,可能導(dǎo)致產(chǎn)品穩(wěn)定性下降,藥效變化。并且其生物活性,可能導(dǎo)致藥效變化。
美國藥典
中國藥典
酶聯(lián)免疫法作為一種成熟、可靠的檢測技術(shù),在E.coli宿主細(xì)胞蛋白檢測中發(fā)揮著重要作用。通過合理設(shè)計實驗步驟和選擇特異性抗體,該方法有助于提高生物制藥產(chǎn)品的質(zhì)量,保障患者用藥安全。未來,隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展,酶聯(lián)免疫法有望在更多領(lǐng)域發(fā)揮其優(yōu)勢,為人類健康事業(yè)貢獻(xiàn)力量。
參考文獻(xiàn)
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[3].GB/T 33411-2016酶聯(lián)免疫分析試劑盒通則
[4].YY/T 1183-2010酶聯(lián)免疫吸附法檢測試劑盒
END
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